鹅外周血白细胞分离液试剂盒-细胞生物学检测-试剂-生物在线
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鹅外周血白细胞分离液试剂盒

鹅外周血白细胞分离液试剂盒

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产品名称: 鹅外周血白细胞分离液试剂盒

英文名称: A kit for leucocyte separation in goose peripheral blood

产品编号: P2670

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产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷433A

品牌商标: solarbio

更新时间: 2024-12-05T09:48:33

使用范围: null

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鹅外周血白细胞分离液试剂盒

操作步骤:

1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液。

2. 在离心管中加入适量分离液(血液体积小于5mL时,加入5mL分离液;大于等于5mL,加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果),将血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后将血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多,加样的时间较长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。)

3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越长,最佳的分离条件需摸索,离心转速最大不超过1200g)。

4. 离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的血浆层;血浆与分离液之间是淋巴细胞层;分离液中为粒细胞层(个体差异或者是分离条件不同,粒细胞层可能分离不明显);最下层为红细胞层。

5. 小心的吸取淋巴细胞层及分离液层细胞到15mL洁净的离心管中,10mL PBS或细胞洗涤液洗涤细胞。250g,离心10min(如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液)

6. 弃上清,5mLPBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min

7. 重复步骤6

8. 弃上清,细胞重悬备用。

 

注意事项:

A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。。

B. 分离液使用时应始终保持室温(18~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。

C. 血液样本最好为新鲜抗凝血(采血2 h以内),为保持淋巴细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。

D. 血液样本不需稀释,直接进行分离即可。

E. 稀释血液或洗涤细胞,不可使用含CaMg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。

分离示意图

 

F. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。

G. 血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件。

H. 如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在收集血液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。

I. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。

 

参考文献:

1. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab InvestSuppl. 1968; 97: 7.

2. Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. VoxSang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.

3. Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974;

4(4): 269-74. 4. Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.

5. Recalde HR. A simple method of obtaining monocytes in suspension. J Immunol Methods. 1984 Apr13;69(1):71-7.

6. BøyumA,LøvhaugD,TreslandL.Separation of leucocytes: improved cell purity by fine adjustments of gradient medium density and osmolality. Scand J Immunol. 1991 Dec; 34(6):697-712.

7. Harris R, Ukaejiofo EO. Tissue typing using a routine one-step lymphocyte separation procedure. Br JHaematol. 1970 Feb; 18(2):229-35.

 

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