持久性化学发光底物
产品名称: 持久性化学发光底物
英文名称: SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate
产品编号: 36223ES60
产品价格: 258.00
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T11:18:52
使用范围: null
规格 | 价格 |
10mL | 258.0 |
100 mL | 1478.0 |
200mL | 2857.0 |
500mL | 4998.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
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- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
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产品简介
YEASEN ECl系列发光试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。
本试剂盒(SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate)采用了独特的发光/增强底物系统,可实现中等飞克级的免疫印迹检测。除用于X光片,还可通过CCD成像仪检测
产品信息
产品名称 |
组分编号 |
规格 |
SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate 持久性化学发光底物 |
36223ES10 |
10 mL |
36223ES60 |
100 mL |
|
36223ES70 |
200 mL |
|
36223ES76 |
500 mL |
产品特点
- 具有极高灵敏度和高信噪比,可检测中等飞克级抗原;
- 信号可持续24小时,发光时间比常规ECL底物长10倍以上;可通过多次曝光获得用于发表论文的高品质印迹图像;
- 可使用较高的抗体稀释倍数,大大节省抗体:
一抗(储液浓度1mg/ml)稀释倍数:1:1000-1:50000;
二抗(储液浓度1mg/ml)稀释倍数:1:50,000-1:250,000。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
36223ES10(10 mL) |
36223ES60(100 mL) |
36223ES70(200 mL) |
36223ES76(500 mL) |
36223-A |
A液 |
5 mL |
50 mL |
100 mL |
250 mL |
36223-B |
B液 |
5 mL |
50 mL |
100 mL |
250 mL |
储存条件
2~8℃保存。有效期1年。【注】:A液(36223-A)需避光保存!
使用说明
【较理想的Western blot 结果需要优化所涉及的各个实验环节,如样品上样量、凝胶类型、转膜方法、膜类型、封闭试剂、一抗浓度、二抗浓度及相应孵育时间等。另外,每个环节尽量提供足量的孵育试剂,以避免膜干燥。】
1. 执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。
【注】:ECL发光液是HRP的显色底物,因此检测系统最终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。
2. 最后一次洗膜的同时,新鲜配制发光工作液:分别取等体积的A液和B液,混匀后,室温放置备用。
【注】:取A液和B液一定要用不同的枪头。
3. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液,勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(100~200μl发光工作液/cm2膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育3-5分钟,准备立即压片曝光。。
【注】:孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小,但勿降低发光液使用比例。
4. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜完全干燥。不可洗去
发光液。
5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。
6. 暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上,压片,分别曝光不同的时间,如数秒到数分钟,定影显影冲洗。
【注】:曝光时间需根据曝光强度做相应的调整。若是背景过高,可使用两张X光胶片同时压片。
注意事项
- 步骤1~5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。
- 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
- 发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因此弱带可曝光1~10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。
- 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1∶1000~1∶4000,二抗1∶2000~1∶5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。
- 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
- 避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
- 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
- 使用生物素-亲和素系统,避免使用牛奶封闭,可能会导致背景过高。
- 叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。
- 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。
- 本品无特殊毒性,按普通化学品处理。
- 本产品仅作科研用途!
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20240515