最高灵敏度化学发光底物
产品名称: 最高灵敏度化学发光底物
英文名称: SuperSignalMaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate
产品编号: 36224ES60
产品价格: 0
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T11:18:52
使用范围: null
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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最高灵敏度化学发光底物产品信息
产品名称 产品编号 规格 储存 最高灵敏度化学发光底物 36224ES60 100ml 4℃ 36224ES70 200ml 4℃ 36224ES76 500ml 4℃产品描述翊圣SuperSignalMaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探?直接或间接婧夏ど系暮怂帷O茨ず笥帽静品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。本试剂盒采用了独特的发光/增强底物系统,降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂,大大提高试剂盒的稳定性,可实现低飞克级的免疫印迹检测。除用于X光片,还可用于自动成像系统。产品特点1)具有极高灵敏度和高信噪比,可检测低飞克级抗原;2)持续发光时间长,荧光可使X光胶片感光达8小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测;3)可使用更高的抗体稀释倍数,大大节省抗体:二抗(储液浓度1mg/ml)稀释倍数:1:100,000-1:500,000。产品组分
组分编号 组分名称 产品编号/规格 36224ES70(200ml) 36224ES76(500ml) MaxiSignalECL-A液 50ml 100ml 250ml 36224-B MaxiSignal ECL-B液 50ml 100ml 250ml运输与保存方法常温运输。4 ºC保存。【注】:A液(36224-A)需避光保存!有效期1年。操作方法【较理想的Western blot 结果需要优化所涉及的各个实验环节,如样品上样量、凝胶类型、转膜方法、膜类型、封闭试剂、一抗浓度、二抗浓度及相应孵育时间等。另外,每个环节尽量提供足量的孵育试剂,以避免膜干燥。】1. 执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。【注】:ECL发光液是HRP的显色底物,因此检测系统最终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。2. 最后一次洗膜的同时,新鲜配制发光工作液:分别取等体积的A液和B液,混匀后,室温放置备用。【注】:取A液和B液一定要用不同的枪头;3. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液,勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(100~200μl发光工作液/cm2膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育3-5分钟,准备立即压片曝光。【注】:孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小,但勿降低发光液使用比例。4. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜完全干燥。不可洗去发光液。5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。6. 暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上,压片,分别曝光不同的时间,如数秒到数分钟,定影显影冲洗。【注】:曝光时间需根据曝光强度做相应的调整。若是背景过高,可使用两张X光胶片同时压片。注意事项1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2)步骤1~5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。3)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。4)发光工作液孵育约3-5分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼?可见的荧仁导噬峡沙中数小时并使X光胶片感光,因此弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。5)由于发光液灵敏度高,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗(储液浓度1mg/ml)稀释倍数:1:5000-1:100000;二抗(储液浓度1mg/ml)稀释倍数:1:100,000-1:500,000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。6)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。7)避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。8)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。9)使用生物素-亲和素系统,避免使用牛奶封闭,可能会导致背景过高。10)金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。11)叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3。12)本品无特殊毒性,按普通化学品处理。附常见问题及解答
胶片成像相反(如白色条带,黑色背景)
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检测体系HRP过量
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膜上呈现棕色或黄色条带
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避光条件下膜上具有发光斑点
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信号持续时间少于8h
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信号较弱
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检测体系HRP过量导致消耗更多底物,导致信号减弱
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进一步稀释HRP偶联试剂。
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抗原抗体量较少
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增大抗体和抗原的使用量。
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转膜效果不佳
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优化转膜条件,提高转膜效率。
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HRP酶活力或底物活力下降
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于暗室中准备1-2ml 本品制备的发光液,关灯后,加入1µl待检测
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