狗外周血中性粒细胞分离液试剂盒
产品名称: 狗外周血中性粒细胞分离液试剂盒
英文名称: A kit for neutrophil separation in peripheral blood of dogs
产品编号: P4130
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷354A
品牌商标: solarbio
更新时间: 2024-12-05T15:41:48
使用范围: null
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狗外周血中性粒细胞分离液试剂盒
操作步骤:
1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝血均可)或者去纤维蛋白血液(不做稀释)。
2. 在离心管中加入适量分离液(血液体积小于5mL时,加入5mL分离液;大于等于5mL,加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果),将血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后将血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多,加样的时间较长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现
象。)
3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越长,最佳的分离条件需摸索,离心转速最大不超过1200g)。
4. 离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的血浆层;血浆与分离液之间是淋巴细胞层;分离液中为粒细胞层(个体差异或者是分离条件不同,粒细胞层可能分离不明显);最下层为红细胞层。
5. 小心的吸取分离液层到15mL洁净的离心管中, 10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心10min(如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液)
6. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。
7. 重复步骤6
8. 弃上清,细胞重悬备用。
注意事项:
A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封避免微生物污染。。
B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
分离示意图
C. 血液样本最好为新鲜抗凝血(采血2h以内),为保持淋巴细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。
D. 血液样本不需稀释,直接进行分离即可。
E. 稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。
F. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。
G. 血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件。
H. 如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在收集血液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。
I. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
参考文献
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