小鼠脾脏单个核细胞分离液试剂盒-细胞生物学检测-试剂-生物在线
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小鼠脾脏单个核细胞分离液试剂盒

小鼠脾脏单个核细胞分离液试剂盒

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产品名称: 小鼠脾脏单个核细胞分离液试剂盒

英文名称: Mouse spleen single nuclear cell isolate kit

产品编号: P4880

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产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷198A

品牌商标: solarbio

更新时间: 2024-12-05T15:41:48

使用范围: null

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小鼠脾脏单个核细胞分离液试剂盒 规格:3×200 mL/kit 保存:本产品对光敏感,应该室温避光储存,保质期 2 年。无菌开封后,保存于室温。  组成: 各种动物脾脏单个核细胞分离液 200mL 全血及组织稀释液 200mL 细胞洗涤液 200mL 单个核细胞分离方法 1. 制备脾脏的单细胞悬液。 2. 取一支适当的离心管,加入与脾脏单细胞悬液等量的分离液(分离液最少不得少于3 mL,总体积不能超过离 心管的三分之二,否则会影响分离效果)。 3. 小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液, 然后小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。) 4. 室温,500~900g,离心20~30min。(根据脾脏单细胞悬液的量确定离 心条件,单细胞悬液量越大,离心力越大,离心时间越长,具体离心 条件可以自行摸索,以达到最佳分离效果)。 5. 离心后,此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层为稀释液层;第 二层为环状乳白色单个核细胞层;第三层为透明分离液层;第四层为 红细胞层。 6. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层至另一洁净的15mL 离心管中,向离心管中加入10ml细胞洗涤液洗涤白膜层细胞,250g, 离心10min。 7. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。 8. 重复步骤7 9. 弃上清,细胞重悬备用。 脾脏单细胞悬液的制备方法 脾脏研磨的方法: 1. 无菌条件下摘取脾脏,撕去脾脏被膜,用眼科剪将脾脏剪成小块。 2. 将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上,加入少量全血及组织稀释液(保证脾脏及获得的细胞处于液体 环境中)。 3. 将脾脏放置于筛网上,使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脾脏(尽量控制研磨力度,保持筛网悬空,避 免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡) 4. 研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网,收集细胞悬液,再经滤网过滤。 分层示意图  注: A. 可用酶消化法,使用胶原酶对脾脏组织进行消化,得到单细胞悬液。 B. 如果最终得到的细胞需要培养,那全过程所需试剂与器材均要求无菌。 C. 根据脾脏的体积控制单细胞悬液的浓度在1亿~10亿个/ml。   注意事项: A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。 B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条 件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。 C. 待分离的组织要求新鲜,避免冷冻和冷藏。 D. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁影响分离效果。 E. 如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在制备单细胞悬液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。  参考文献: 1. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.  2. Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.  3. Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.  4. Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.  相关产品: R1018 细胞洗涤液 S9020 优级胎牛血清 R1017 全血及组织稀释液 31800 RPMI Medium 1640 T1300 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚红 YA0902 一次性巴氏德吸管 各种其他动物及其他细胞的分离液及试剂盒