HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit-cDNA及合成纯化-试剂-生物在线
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HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

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产品名称: HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

英文名称: HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

产品编号: 11135ES50

产品价格: 0

产品产地: Yeasen

品牌商标: Yeasen

更新时间: 2024-12-10T13:22:33

使用范围: null

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HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

11135ES50

50 T

-20℃

626.00

HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

11135ES70

200 T

-20℃

1836.00

产品描述

HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase开发的试剂盒。HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase相比,HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达55℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达12 kbcDNA

试剂盒中包含由总RNAmRNA合成高质量第一链cDNA所需的所有成分,并提供两种cDNA合成引物:Random Primersoligo (dT)18,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

11135ES50 (50 T)

11135ES70 (200 T)

11135-A

RNase free ddH2O

1 mL

2×1.2 mL

11135-B

5×HifairTM Ⅲ Buffer

200 μL

2×400 μL

11135-C

HifairTM Ⅲ Enzyme Mix

100 μL

2×200 μL

11135-D

Oligo (dT)18 (50 μM)

50 μL

200 μL

11135-E

Random Primers (50 ng/μL)

50 μL

200 μL

】:15×HifairTM Ⅲ Buffer包含dNTP

2HifairTM Ⅲ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

引物选择

1. 若后续为PCR实验

1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA

2)基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下,用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成时,可改用Oligo (dT)18Random Primers重新进行逆转录。

3Random Primers特异性较低,所有RNA,包括mRNArRNAtRNA均可作为Random Primers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高,或者模板为原核生物来源,且使用Oligo (dT)18或基因特异性引物(GSP)无法有效引导cDNA合成时,可使用Random Primers作为引物。

2. 若后续为qPCR实验

建议将Oligo (dT)18Random Primers混合使用,可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成,有助于提高定量结果的重复性。


第一链cDNA合成操作步骤

一、若后续为PCR实验

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 14 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 ng/μL)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μgmRNA:10 pg-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

14 μL

5×HifairTM Ⅲ Buffer

4 μL

HifairTM Ⅲ Enzyme Mix

2 μL

3. 逆转录程序设置

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