测定意义: 

DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

测定原理:

DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻 联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在 460nm 处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加 速率，计算 DAO 活性。

自备实验用品及仪器:

 天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 80mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 0.5mL×1 支，4℃保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。 2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建 议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

测定操作表

酶活性计算公式 

（1） 按样本蛋白浓度计算：

酶活性定义：在 pH7.2，温度为 37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量为一个酶活力单位（U）。 DAO 活性（nmol/min/mg prot）= d A e ′ 460 ×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpr

（2） 按样本质量计算：

酶活性定义：在 pH7.2，温度为 37℃条件下，每克组织每分钟催化产生 1nmol H2O2所需 的酶量定义为一个酶活力单位。 DAO 活性（nmol/min/g）= d A e ′ 460 ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T= 18×A460÷W

（3） 按细胞数量计算：

酶活性定义：在 pH7.2，温度为 37℃条件下，每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。 DAO 活性（nmol/min/104 cell）= d A e ′ 460 ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）÷T= 18×A460÷ 细胞数量

(4) 按液体体积计算

酶活性定义：在 pH7.2，温度为 37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生 1nmol H2O2 所 需的酶量定义为一个酶活力单位。 DAO 活性（nmol/min/mL）= d A e ′ 460 ×V 反总÷V 样÷T= 18×A460 ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；

V 反总：反 应总体积，1mL；V 样：反应中样本体积，0.25mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，30min

注意事项

1、如果 OD 值小于 0.01，适当加大提取用的样本质量； OD 值大于 0.8，粗酶液可适当稀 释，或者减少提取用样本量。

2、样品蛋白质含量需要另外测定。