血清/血浆miRNA提取试剂盒 19332ES
产品名称: 血清/血浆miRNA提取试剂盒 19332ES
英文名称: MolPure® Serum/Plasma miRNA Kit 血清/血浆miRNA提取试剂盒
产品编号: 19332ES08
产品价格: 265.00
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T11:18:52
使用范围: null
规格 | 价格 |
5 T | 265.0 |
50T | 1968.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
- 二维码 : 点击查看
产品简介
MolPure® Serum/Plasma miRNA Kit适用于血浆、血清、淋巴液等样品中总RNA和miRNA的提取。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,配合本公司独特的裂解液配方可以可最大限度的回收高纯度RNA和miRNA。提取的RNA纯度高,质量稳定可靠,可适用于RT-qPCR等下游应用实验。
产品信息
货号 |
19332ES08 / 19332ES50 |
规格 |
5 T /50 T |
组分信息
类别 |
组分编号 |
组分名称 |
19332ES08 |
19332ES50 |
Part I |
19332-A |
裂解液LB (LB Buffer S3) |
5 mL |
50 mL |
Part II |
19332-B |
RNA吸附柱S3 (MolPure® RNA Column S3) |
5 个 |
50 个 |
19332-C |
miRNA吸附柱S3 (miRNA Column S3) |
5 个 |
50 个 |
|
19332-D |
2 mL收集管 (2 mL Collection Tube S3) |
10 个 |
100 个 |
|
19332-E |
去蛋白液PL* (PL Buffer S3*) |
1.2 mL |
12 mL |
|
19332-F |
漂洗液W* (Wash Buffer S3*) |
1.3 mL |
13 mL |
|
19332-G |
RNase-free H2O |
1 mL |
5 mL |
储存条件
Part I组分冰袋运输,4℃避光保存。Part II组分常温运输,常温保存。产品有效期12个月。
注意事项
1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2. 漂洗液W*添加乙醇后,易形成沉淀,不影响使用。使用时,吸取上清即可。
3. 裂解液LB和去蛋白液PL*含有刺激性物质,为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途!
使用说明
使用前准备
1. 自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,氯仿、无水乙醇,RNase-free离心管等。
2. 除特殊指明外,所有的离心步骤均在室温完成,使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。
3. 首次使用前,在去蛋白液PL* 和漂洗液W*瓶中参照下表加入指定体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。
编号 |
组分名称 |
5 T规格无水乙醇加入量 |
50 T规格无水乙醇加入量 |
19332-E |
去蛋白液PL* |
2.8 mL |
28 mL |
19332-F |
漂洗液W* |
5.2 mL |
52 mL |
操作方法
一、样本预处理:
1. 取250 μL血清或血浆等液体样本转移至1.5 mL的RNase-free离心管中。
【注】:不足 250 μL时,需用PBS或生理盐水补足。
2. 加入750 μL裂解液LB,反复吹打,并剧烈振荡混匀。
3. 室温(22-30℃)静置5 min。
4. 加入200 μL 氯仿(自备),剧烈振荡15 sec混匀。
5. 室温静置2 min。
6. 4℃ 12,000rpm 离心10 min,使样品分层。取上层水相转移至1.5 mL的RNase-free离心管中。
【注】:样品会分为三层,下层为有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于上层水相中。
【注】:上层容量约为所加裂解液LB总量的70%。如加入750 μL 裂解液LB,上层水相约为525 μL。建议吸取500 μL,以防吸到中间层造成DNA污染。
二、(推荐)总RNA(含miRNA)提取方法:
1. 将RNA吸附柱S3套入2 mL收集管中,备用。
2. 加入1.5倍上层水相体积的无水乙醇(自备)至上层水相,吹打混匀。
【注】:出现沉淀属正常现象。
【注】:无水乙醇必须是室温保存。
3. 将上述混合液加入到RNA吸附柱S3中,12,000 rpm离心1 min,弃掉废液。
【注】:混合液每次最大加入体积650 μL,可分多次离心。
【注】:离心后,若滤膜仍有液体残留,可延长离心时间至5 min。
4. 加入700 μL去蛋白液PL*,12,000 rpm离心30 sec,弃废液。
【注】:确保去蛋白液PL*已添加无水乙醇。
5. 将RNA吸附柱S3放回收集管,加入500 µL漂洗液W*,12,000 rpm室温离心30 sec,弃废液。
【注】:确保漂洗液W*已添加无水乙醇。
6. 重复一遍步骤5。
7. 将RNA吸附柱S3放回收集管,空柱12,000 rpm室温离心2 min,以除去残留的漂洗液W*。
8. 将RNA吸附柱S3放入新的1.5 mL RNase-free离心管中,在RNA吸附柱S3中央加入30-50 µL RNase-free H2O,室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液,即为RNA溶液。
【注】:可通过以下方式提高回收产量:①65℃预热RNase-free H2O;②将RNA滤液再次上柱,室温放置2 min后,洗脱。
9. RNA溶液可置于-80℃长期保存。
三、仅当miRNA提取量不理想时,可尝试用miRNA富集方法:
1. 将RNA吸附柱S3和miRNA吸附柱S3分别套入2 mL收集管中,备用。
2. 加入0.5倍上层水相体积的无水乙醇(自备)至上层水相,吹打混匀。
【注】:无水乙醇必须是室温保存。
3. 将上述混合液加入到RNA吸附柱S3中,12,000 rpm离心1 min,收集滤液。并将滤液转移至新的RNase-free离心管中。
【注】:混合液每次最大加入体积650 μL,可分多次离心。
【注】:miRNA在滤液中,吸附柱上为去除miRNA的总RNA。
4. 计算滤液体积,加入0.65倍体积室温保存的无水乙醇,吹打混匀。
5. 将上述混合物加入miRNA吸附柱S3中,12,000 rpm离心1 min,弃掉滤液。
【注】:混合液每次最大加入体积650 μL,可分多次离心。
【注】:离心后,若滤膜仍有液体残留,可延长离心时间至5 min。
6. 按照总RNA(含miRNA)提取方法步骤4~9漂洗,获取miRNA。
【注】:此操作中,步骤4~9用到的离心柱应为miRNA吸附柱S3。
Ver.CN20231114