Ni-TED 6FF Chromatography Column, 5 mL His标签蛋白纯化预装柱,5 mL
产品名称: Ni-TED 6FF Chromatography Column, 5 mL His标签蛋白纯化预装柱,5 mL
英文名称: Ni-TED 6FF Chromatography Column, 5 mL His标签蛋白纯化预装柱,5 mL
产品编号: 20498ES08
产品价格: 728.00
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T11:18:52
使用范围: null
规格 | 价格 |
5 mL | 728.0 |
5×5 mL | 2938.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
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产品简介
Ni-TED Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联三(羧甲基)乙二胺(TED)为配体,螯合镍离子(Ni2+)而制备成的一种介质。Ni-TED Agarose Resin 6FF与Ni2+具有5个螯合位点,使得其对于 Ni2+具有很强的约束力,这一特性赋予了本品具有优异的 DTT以及 EDTA 耐受性,特别适用于纯化真核细胞培养上清液中的His标签蛋白。本品用于带有 His 标签的蛋白纯化时拥有稳定性高、复杂环境中一步纯化蛋白、目标蛋白质吸附量大(但会低于Ni-NTA)、蛋白洗脱条件温和、介质易再生、重复利用率高等优点。
Ni-TED 6FF Chromatography Column是一种以Ni-TED Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱,规格5 mL, 该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户操作。
产品信息
货号 |
20498ES08 / 20498ES25 |
规格 |
5 mL /5×5 mL |
产品性质
基质(Matrix) |
高度交联的6%琼脂糖凝胶 |
粒径(Bead size) |
45-165 µm |
载量(Capacity) |
>15 mg His-tagged protein(27.5 kDa)/mL 基质 |
耐压(Tolerance Pressuremax) |
0.3 MPa, 3 bar |
储存缓冲液(Storage Buffer) |
20%乙醇 |
pH稳定性 |
4-10(工作);2-14(CIP) |
化学稳定性 |
24 h耐受10 mM EDTA,5 mM DTT, 5 mM TCEP,20 mM β-巯基乙醇,1 M NaOH,6 M 盐酸胍 ;2 h耐受500 mM咪唑,100 mM EDTA |
柱子尺寸(Column Size) |
1.6×2.5 cm(5 mL) |
储存条件
2~8℃保存,有效期4年。
使用说明
- 纯化流程
- 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱。Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡缓冲液:20 mM PBS,0.5 M NaCl,pH 7.4
洗杂缓冲液:20 mM PBS,0.5 M NaCl,0-30 mM 咪唑,pH 7.4
洗脱缓冲液:20 mM PBS,0.5 M NaCl,50-500 mM 咪唑,pH 7.4
- 样品准备
在上样前将宿主细胞碎片通过离心等方式去除,7000 rpm离心15 min,收集上清。然后过 0.45 um 的微孔滤膜。为了获得最大的载量,不要在样品蛋白溶液中添加咪唑。
- 样品纯化(以AKTA使用为例)
a)将泵管道注满去离子水。将预装柱顶端堵头卸掉,连接到层析设备入口,然后将底端堵头打开,连接到层析设备。
b)3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
c)至少5倍柱体积的平衡缓冲液平衡色谱柱。推荐流速为1-5 mL/min。
d)利用泵或注射器上样。【注】若样品粘度增加,即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压;上样量不要超过柱子的结合能力;大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
e)洗杂缓冲液冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。
【注】在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
f)洗脱缓冲液一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
g)随后依次用2倍柱体积的1 mol/L NaOH和5倍柱体积的去离子水清洗填料。5倍柱体积的20%乙醇平衡填料,最后将填料保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。
- SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
- 在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5 Mpa)或者填料上面出现明显的污染时,需对其进行在位清洗(Cleaning-in-Place,CIP)。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物,如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
- 去除强疏水结合的蛋白,脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积,接触时间为15-20 min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1 M醋酸溶液,接触时间为1-2 h。去污剂处理后,需用70%的乙醇清洗5倍柱体积,彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2) 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5 M NaCl 溶液接触10-15 min,之后用去离子水清洗10倍柱体积。
清洗好的柱子可再用20%乙醇冲洗2个柱体积,最后将填料保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20240606