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悬浮细胞培养手则

作者:上海启达生物科技有限公司 2024-09-23T00:00 (访问量:16266)

细胞培养基本分这三类,贴壁细胞, 悬浮细胞和半悬浮细胞,贴壁细胞在科研实验中占比最大,因而在遇到悬浮细胞的时候通常会觉得这怎么办?

 

悬浮细胞顾名思义就是细胞悬浮在培养基中生长,所以在培养的时候一定要在瓶子上做好备注,免得像培养贴壁细胞一样,一下就给当废液全弃掉了

悬浮细胞的培养和换液技巧主要包括以下几个步骤:

1. 准备工作:在进行悬浮细胞培养之前,确保所有实验器材和材料都已无菌处理。准备培养基、细胞悬液、离心管、移液管、培养瓶等。

2. 细胞接种:将细胞悬液均匀接种到含有新鲜培养基的培养瓶中。注意接种时动作要轻柔,接种密度要保持在35%以上, 避免产生气泡。

3. 培养条件:将接种好的细胞放置在适宜的温度和CO2浓度的培养箱中培养。悬浮细胞培养时可以提供培养基在瓶中的比例,悬浮细胞铺板后,将瓶子在水平面打十字震动,以保持细胞悬浮状态并且密度均一。

4. 换液操作:当培养基颜色变黄或细胞密度达到一定水平时,需要进行换液。首先,将细胞悬液转移到离心管中,以低速离心(通常为1000rpm左右)几分钟,使细胞沉淀。去除旧培养基:小心地吸出上层的旧培养基,注意不要扰动细胞沉淀。添加新鲜培养基:向离心管中加入适量的新鲜培养基,轻轻悬浮细胞沉淀。

5. 重新接种:将悬浮好的细胞悬液重新接种到新的培养瓶中,继续培养。

若悬浮细胞生长比较慢,隔2-3天观察一次,若培养基无颜色变化,以T25为例,每2-3天可以额外添加250ul-500ul的血清,以满足细胞营养需求 ,若瓶内液体太多,可以将培养瓶竖起来放置在超净台内,待细胞完全沉淀下来,用吸管小心的吸取培养瓶内上层液面培养基,添加500ul新的培养基或者血清。

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悬浮细胞冻存:

悬浮细胞无需胰酶消化,可以直接离心后冻存, 若细胞成团较多较大,可以去除旧的培养基,PBS清洗一次,加胰酶消化1-2分钟后,轻轻震动培养瓶,待细胞分散后加入完全培养基终止,离心,加冻存液冻存。

在整个过程中,要确保操作的无菌性,避免污染细胞。此外,根据细胞类型和实验要求,可能需要调整培养基的成分、细胞密度和换液频率。

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