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翌圣高品质分子诊断PCR原料,选择多,性能优!

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-11-28T00:00 (访问量:13709)

分子诊断是以 DNA、RNA 或蛋白质分子为诊断材料,通过检查人体内源基因或外源(病原体)基因的存在、缺陷或表达异常,对人体状态或疾病作出特异性诊断的方法和过程。分子诊断技术主要是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR)、原位杂交FISH、基因芯片和基因测序技术,与杂交、高通量测序技术相比,PCR技术主要优势在于灵敏度更高、特异性更强、操作简单且易于推广,在检测基因数量上有一定的局限性,但从短期来看,PCR技术仍将是分子诊断的主流技术。

翌圣生物在酶原料领域深耕多年,长期为IVD企业、第三方检验机构、科研机构等提供高品质、高性价比的分子诊断PCR原料,包括逆转录酶、RNase 抑制剂、Taq DNA 聚合酶、尿嘧啶糖基化酶(UDG/UNG酶)、taq酶抗体、dNTPs等单组份以及经过体系优化的qPCR/RT-qPCR预混液,可为临床/非临床诊断试剂盒开发提供性能优越、稳定的酶原料。

 

分子诊断PCR扩增工作流程及原料一览

一、核心酶原料-Taq DNA聚合酶

随着应用检测领域的拓展和市场需求的提升,野生型Taq DNA聚合酶已不能完全满足需求,翌圣ZymeEditorTM酶改造平台针对不同的应用需求,全方位定向改造了Taq DNA 聚合酶,推出一系列适合全预混、耐抑制、超洁净等匹配不同应用方向的热启动Taq DNA 聚合酶。

· 优越的稳定性:配制成含引物探针的全预混液,37℃ 7天处理后,低浓度检出无变化

图1:以HBV核酸为模板,使用10726ES配制成qPCR全预混液,除模板外所有体系在37℃下放置7天测试加速稳定性。结果显示:高、中、低浓度Ct值和荧光值无显著变化,表明以10726ES配制的预混液性能稳定。

· 宿主gDNA残留低:E. coli基因组DNA残留<0.5 copies/ 100 U

图2:E. coli基因组线性范围:30 fg/μL-300 pg/μL,相关性R2=0.9999。(B) 三批次Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA Polymerase的E. coli基因组DNA残留<0.5 copies/ 100 U。

 

二、核心酶原料-逆转录酶

作为RT-qPCR反应的关键原料之一,逆转录酶需要具备更快的逆转录速度、更高的合成产量以及更好的耐热性能。为了获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶,翌圣生物在M-MLV的基础上通过基因改造,开发出RNaseH活性更低,热稳定性更高,持续合成能力更强的Hifair®系列逆转录酶。

· 可耐受58℃反应温度,适合复杂RNA模板的逆转录

图3:将Hifair® V Reverse Transcriptase及进口品牌T*的逆转录酶分别在55℃及58℃下孵育30min检测残余酶活。结果显示Hifair® V Reverse Transcriptase在58℃下孵育30min仍能保持70%活性,远超进口品牌。

· 应用于RT-qPCR检出率优于其他品牌,检出范围:1 pg-1 μg

图4:以1 pg-1 μg(7个梯度)的293T细胞总RNA为模板,使用Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR(Cat#11142)、V*、T*进行逆转录,得到的cDNA进行qPCR定量分析。结果显示,11142ES灵敏度可达1 pg,检出率优于竞品。

 

三、其他酶及酶抑制剂:RNase抑制剂、UDG酶

翌圣提供多种历经IVD工业应用验证的酶、RNase 酶抑制剂、Taq酶抗体等原料产品,为广泛的体外诊断产品的开发和生产提供丰富的高品质原料解决方案,相关酶类等产品在保护分子检测目标产物中广泛应用。

RNase 酶抑制剂:翌圣以可溶形式在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源/猪源RNase抑制剂,能够广泛抑制各种类型RNase(RNase A, B, C),并且该抑制剂不会抑制聚合酶的活性,已验证可广泛应用于RT-PCR/qPCR、RNA-seq、cDNA克隆和文库构建等多个应用场景。除了常规RNase抑制剂,还开发了经过UCF.ME®超低残留工艺处理,宿主残留更低,适合对背景菌要求更为严格的应用场景的RNase抑制剂,助力解决病原检测中的背景菌干扰,提高检测准确度。

UDG酶:尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),与dUTP搭配使用,可建立PCR防污染体系,翌圣研发的热敏、低残留UDG酶,可避免常规UDG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dU扩增产物的降解作用,同时防止分子酶中存在的背景菌造成PCR结果假阳性,对于准确鉴别感染病原体,协助感染、传染病的临床诊断至关重要。

Taq酶抗体:非特异性扩增是显著影响PCR性能的主要问题之一,热启动技术可以有效减少非特异扩增。抗体修饰的热启动酶封闭效率高,效果佳,室温下稳定,酶活释放速度快,翌圣生物开发的热启动Taq酶双封闭抗体不仅可以封闭Taq酶的5'→3'聚合酶活性,还能同时封闭Taq酶的5'→3'外切酶活性,双管齐下,既能有效防止错配或引物二聚体引起的非特异性扩增,又能防止探针或引物降解产生非特异信号,双重提升试剂的稳定性。

 

四、通用高性能全预混qPCR预混液

翌圣生物提供高品质qPCR试剂,高性能的热启动Taq酶搭配优化的缓冲体系,可提供包括通用型预混液,全预混预混液,基因分型预混液,可冻干预混液等,具有使用简便、灵敏度高、稳定性强的特点,加快您的分子诊断产品开发。

· 试剂通用性好:适配多类型多重引探(已验证超40种不同类型靶标),具有优秀的扩增性能;

· 超强全预混稳定性:37℃可放置14天,4℃可放置28天,反复冻融50次性能稳定;

· 灵敏度高特异性好:灵敏度可检测到0.25 copy/μL,特异性48孔阴性不起峰;

· 支持快速程序:兼容快速程序,30min即可出结果;

· dUP/UDG防污染体系:引入了dUTP/UDG防污染系统,可有效防止气溶胶污染;

· 多平台多体系适用: Bio-Rad CFX96、ABI Q5、7500、Slan、天隆等均适配。

图5:基于全预混试剂稳定性考察,实验组与对照组试剂的Ct值偏差(△Ct值)在±0.5以内,荧光值偏差在15%以内,翌圣全预混试剂具有优秀的多重扩增稳定性能。

对16710ES分别进行三种方式处理(4℃、37℃以及冻融)。实验组于4℃、37℃分别处理7天,冻融50次,与对照组(-20℃保存)在4组多重扩增体系(组1、组2及组4为4重扩增体系,组3为3重扩增体系)下进行稳定性测评。

 

五、通用高灵敏RT-qPCR预混液

一步法RT-qPCR试剂整合逆转录酶和热启动酶的优越性能,配合优化的缓冲体系,可实现个位数拷贝模板的快速灵敏检测,经过呼吸道疾病、动物疫病、科研体系等各类客户市场验证,可满足各种应用方向的需求。

· 通用性强:适用病原微生物、人源基因组、植物等多物种的核酸进行qPCR扩增、检测;

· 优异的扩增灵敏度:精心优化的缓冲体系,提高了低浓度模板的检测灵敏度,可高达250 copies/mL;

· dUTP/UDG 防污染系统:引入 dUTP/ Heat-labile UDG 防污染系统,高效降解产物的气溶胶污染,降低假阳性,确保结果真实可信;

· 支持快速程序:兼容快速程序,40 min内完成结果检测;

· 优异的储存稳定性:37℃放置14天、反复冻融10次试剂性能稳定。

图6:使用翌圣RT-qPCR预混合(16630ES)和市面上同类产品Supplier-A,同时检测4个病原靶标(副流感病毒HPIV2、副流感病毒HPIV4、呼吸道合胞病毒HRVA和鼻病毒RSVA),结果显示16630ES检测灵敏度高于supplier-A。

 

产品推荐

 

产品类型

产品名称

货号

高性能PCR单酶系列

Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase, 5 U/μL

10726ES

Hifair® V Reverse Transcriptase(200 U/μL)

11300ES

Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG),heat-labile, 1 U/μL

10303ES

Murine RNase Inhibitor(40 U/µL)  

10603ES

dNTP Mix(25 mM each)

10125ES

超洁净PCR单酶系列,超低宿主残留

Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL)

14314ES

Hifair UCF.ME® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

14608ES

UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL

14466ES

UCF.ME® Murine RNase Inhibitor(40 U/µL)

14672ES

可冻干PCR单酶系列

Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (5U/μL)

14316ES

Hifair® V Reverse Transcriptase, Glycerol-free(600 U/μL)

11301ES

Uracil DNA Glycosylase(UDG),Heat-Labile(1 U/μL,Glycerol-Free)

10707ES

Murine RNase Inhibitor(200 U/µL,Glycerol-free)

10703ES

RT-qPCR预混液

高灵敏快速Hifair® C203P1 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG Plus)

16630ES

通用全预混Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG Plus)

11899ES

通用快速可冻干Hifair® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit

11831ES

qPCR预混液

3代通用全预混Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix(One Tube)

16710ES

通用高灵敏Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG plus)

13891ES

2代快速全预混Hieff Unicon® SuperproⅠTaqMan qPCR Master Mix(UDG plus)

11827ES

低宿主残留Hieff Unicon® PureproⅠTaqMan qPCR Master Mix(UDG plus)

11853ES

高灵敏可冻干Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG plus)

11893ES

 

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