一体化3D干细胞扩增系统
使用手册
南京瑞康健生物医学技术有限公司
通 知
本手册的修订与更新恕不另行通知。请关注我们的网站查看最新版本：
产品注册
购买产品后请您及时注册，您将获得一体化3D干细胞扩增系统配套的PS/PCL支架的促销优惠码和最新的产品信息。请按以下网址进行注册。
目 录
一体化3D干细胞扩增系统概述
三维细胞培养支架技术
一体化3D干细胞扩增系统：零件和装配
细胞培养：静态细胞种植和动态细胞培养
1.一体化3D干细胞扩增系统概述
感谢您购买这款设备！
该一体化3D干细胞扩增系统是基于三维动态灌注技术开发和制造的。是为模拟细胞在体内生长所需的生理微环境而特别设计。
该一体化3D干细胞扩增系统已经集成了我们成熟而独特的三维动态灌注细胞培养技术。能够模拟生物体内的三维微环境进行哺乳动物细胞培养。我们的生物反应器还具有如下独特的优势。
1) 更大的细胞接种三维表面积：一体化3D干细胞扩增系统通过不同的产业化配置，可提供9.5-3960cm2的三维表面积供细胞接种和生长，从而满足客户各种实验和研究需求。
微电脑智能控制器（数字显示或液晶显示），具有泵转速、转向、定量、控温、CO2气体浓度、门温、照明、紫外灯、定时控制等功能，还具有超温、安全保护、报警功能。
配有紫外杀菌灯可定期对箱体内部进行消毒，可有效杀灭箱体内循环空气和增湿盘水蒸气的浮菌，从而有效防止细胞培养期间的污染。
2) 触摸彩屏智能控温仪除以上功能外，可程式编程，可显示运行曲线，可直接查看同一时间的温度、湿度、CO2浓度三组曲线的变化情况及异常报警开关功能，控温更精确，配有进口红外浓度探头，CO2浓度更稳定，安全保护功能更完善。
3) 可配RS-485接口，可连接打印机和计算机，记录温度参数的变化情况（选配）。
4) 一次性使用，不需要高温高压灭菌所有部件和管路。
6) 5) 主动式CO2和O2交换，更好的满足了细胞生长所需环境。CO2和O2气体通过装置溶入细胞培养基中，可以更好地保持细胞生长所需环境。
数显式控制的蠕动泵易于操作，通过调节流量可以更好地满足个性化的需求；利用此设备还能研究流速或者剪切力对细胞生长的影响。
2.三维细胞培养支架技术
一体化3D干细胞扩增系统中的最大特点是培养室内采用了三维细胞培养支架，此支架是南京瑞康健生物医学技术有限公司运用其专有的3D精密微制造工艺特别设计制造的。与一般海绵状多孔支架材料不同，该支架具有100%的开放且相互连通的小孔，因此，细胞培养液可以容易地流通过支架空隙，从而消除了其他多孔支架经常遇到的营养/废物交换不畅的问题。该支架的制造材料有可生物降解和非生物降解两种可供选择。整个支架是由尺寸均匀的聚合物纤维构成，相邻层面的纤维90o垂直排列，形成了三维的100%互连的多孔结构（详见图）
三维细胞培养支架的其他重要特征：
●已经辐照灭菌，可直接使用；
●微米级纤维结构，100%开放互连的孔隙；
●细胞培养效率高；
●易于分离细胞生长因子和蛋白；
●支架材料不含任何有机溶剂残留。
3.一体化3D干细胞扩增系统：零件和装配
注意：使用本一体化3D干细胞扩增系统，无需加湿。
一体化3D干细胞扩增系统具有4个独立的培养室。培养室适应3种不同的尺寸，适用于24孔、12孔和6孔的三维细胞培养支架。速度范围0-60转/分钟，可同时支持4个培养室同时培养，系统具有内置的CO2交换系统，可以在细胞培养基中持续的溶入CO2、O2。
3.1部件清单。
表1.一体化3D干细胞扩增系统各部件编号及描述
3.2一体化3D干细胞扩增系统
◆空气过滤器：两段黄色标记的短管，各连上一个0.20微米的空气过滤器，分别接于气液交换器叉管与储液瓶的黄色接口。
5)重复步骤4）将其余的通道连接好。
6)连接好所有管路后，将培养液注入培养液储液瓶（培养基储瓶最大容积90毫升，表2给出了培养室和管路所需要的培养液的体积）
7)拔出培养液储液瓶注入口的硅胶塞，并放置于无菌台表面。用移液管吸取所需培养液量，注入到储液瓶（见下图）。然后用75%酒精擦拭培养液瓶盖注入孔边沿和硅胶塞，将培养液注入口用硅胶塞塞紧。
表2.充满培养室和管路所需要的培养基的体积
项目 | 培养液体积 |
培养室 | 60ml |
管道等 | 10ml |
8）细管安装于循环泵上，将细管两端的2个塑料卡子，卡在泵盒相应的卡口。此时细管应稍微绷紧（图8）。然后将泵盒装回蠕动泵：泵盒下端有两个突出的锁钩，先安装固定钩的一侧，钩住泵上的金属扣柱，再安装另一侧（图9），随后按下听到“咔嗒”一声，泵盒锁住。并整理好该多余的管路（图10）。
9）完成上述步骤后，设置循环泵转速为20转/分钟，进行温度平衡工作。当培养液进行温度平衡时，可进行下一步骤：静态接种细胞及3小时的静态培养。
4.细胞培养：静态细胞种植和动态细胞培养
使用一体化3D干细胞扩增系统进行细胞的动态培养需要以下步骤和条件：
1.3D灌注前进行培养液平衡；
2.3D支架细胞接种；
3.短期慢速3D灌注；
4.无菌条件。
4) 取出培养仓内的支撑。
5) 夹取接种好的三维细胞培养支架插入培养仓内支撑中。（见图）
6) 依次安装完毕旋紧反应仓上盖。
7) 每个培养室重复步骤3）-6）。
8) 将反应器移入培养箱静置3h。至此完成了3D灌注的准备工作。
9) 静置3h后，打开止流夹（警告：止流夹没有打开的话，在灌注过程中会产生积压以致培养失效），设置泵速20转/分钟。待培养仓充满培养液，观察储液瓶内的培养液不能够吸出时应补充培养液。
10) 调整泵速1.9~2.1转/分钟按下启动键并开始缓慢灌注24小时。图6和表8给出的了速度值与培养室规格和泵转速的关系。
表3.3DPS支架表面总面积的增长
