Human细胞应用及其残留DNA质控

基因与细胞治疗产品，通常会使用含有工程化基因构建的载体或递送系统，对人体细胞的遗传物质DNA进行基因修饰、改变基因的表达方式或调节细胞生物特性，以达到治疗的目的。

当宿主细胞为Human来源时，载体系统在宿主细胞内完成扩增后，通过裂解宿主细胞、分离纯化，收集得到高纯度的载体系统。收集到的溶液中除载体系统外，还有Human宿主细胞的残留DNA。

残留DNA风险及法规监管要求

国家药品监督管理局药品评审中心（CDE）发布的关于基因治疗产品指导原则中明确指出需对DNA残留量和残留片段大小进行控制，建议尽量将DNA残留片段的大小控制在200bp以下。

ICH Q9中也强调，对于不同的细胞系根据其来源和遗传背景来确定宿主DNA的测试：

●通过降低生物活性来减少宿主细胞来源的DNA的致瘤性和感染性风险；

●通过降低宿主DNA含量，减小DNA片段的大小至功能基因大小（目前的证据表明为200bp）以下；

●在终产品中需要检测宿主DNA的含量和片段大小分布情况；

●如果使用到DNA清除，降解或者失活的方法，则需要方法学验证。

Human细胞作为宿主细胞，同样适用于这一要求。根据法规要求，应对中间产品、半成品及成品中的Human残留DNA进行检测，确保残留的DNA片段大小和数量低于风险要求。

残留DNA检测方法

《中华人民共和国药典》2020年版第三部规定，外源性DNA残留检测采用DNA探针杂交法、荧光染料色法和定量PCR法。目前市场上对宿主细胞残留DNA检测，主要采用荧光探针qPCR方法，qPCR法具有极高的灵敏度、序列特异性和准确性，可为生物制药工业在工艺研究和成品质量控制方面提供可靠的检测手段，现也已成为各生物制品厂家首选检测方法。

翌圣生物自主研发的Human宿主细胞DNA残留检测试剂盒（Human Host Cell DNA Residue Detection Kit），经验证可用于GMP体系下的生物制品中Human基因组DNA残留检测，并作为放行质量标准。依据药典与法规的方法学和标准进行的验证结果表明，翌圣生物Human HCD Kit匹配且优于专属性、准确性、精密度、标曲线性、耐用性等检测标准，定量范围为30fg/μL~300pg/μL。该试剂盒可快速准确定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成品中Human残留DNA残留量。还研发了与Human残留DNA检测试剂盒配套使用的宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒，以及配套的自动化核酸提取仪器。

Human残留DNA检测Kit产品性能

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灵敏度高：检测下限可低至10 fg/μL；

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准确性高：DNA参考品与国家标准物质标曲基本无偏差，检测值CV＜5%；

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精密度高：重复性CV值＜10%，好于行业标准（15%），中间精密度＜15%；

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专属性强：不同细胞系间无交叉反应；

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定量准确：配套专属磁珠法样本前处理试剂盒；

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操作时间短：3小时内完成全部检测流程；

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稳定性好：多次反复冻融扩增效率仍较高，-20℃可储存2年。

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