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那些年消化类器官踩的坑

作者:上海启达生物科技有限公司 2024-10-12T00:00 (访问量:11177)

类器官的培养是一种利用干细胞技术,模拟人体内器官发育过程,构建出具有类似器官结构和功能的三维细胞培养模型。这种模型能够帮助科学家更好地理解器官的发育、疾病的发生机制以及药物的作用效果。类器官一般通过诱导和干预进行类器官的纯化,传代也是培养类器官不可缺少的步骤;

但是消化类器官总是会莫名奇妙的出问题 ,有些类器官半天消化不下来,有些类器官换个液都能给冲下来,类器官怎么消化,来看看我们的总结吧!

 

一、如何判断类器官可以消化了,小启经常采用以下三个方面来判断:

1.更换新鲜的培养基后,第二天培养基就变黄了,并且类器官在4X镜下整体有50%以上的汇合;

2. 有少部分类器官和细胞发生脱落现象,从Matrigel中脱离,漂浮在培养基中;

3. 细胞覆盖Matrigel液滴的边缘,显微镜下已经看不到Matrigel胶,整个底部都是迁移的类器官。

 

判断好类器官可以进行消化了,我们就来整理下小启在消化类器官踩的坑吧

 

第一坑:打死都消化不下来的类器官:

脑癌类器官以培养时间长著称,正常的培养没个把月根本测不出类器官指数,于是消化成了这个细胞的难点 ,类器官培养的经验教训之一:培养的类器官在同一个孔中尽量不要时间太久, 越久越消化不下来,

 

培养超过一个月的类器官,不建议使用直接使用组织消化液消化,采用以下步骤消化类器官

1. 先用刮刀先把类器官刮下来,加适量的PBS洗涤后,收集到离心管中;

2. 采用100um的细胞滤网过滤,以拦截比较大块的类器官;

3. 准备新的离心管,将滤网反转用PBS冲洗,将大的类器官冲洗下来;

4. 将冲洗的类器官混悬液进行离心去除PBS,加入适量的组织消化液消化;37°水浴消化5分钟后,用1000ul枪头轻轻吹打20次左右,立刻加入同等的完全培养基终止。

5. 配平,1500转离心3分,对于比较容易分散的类器官,如肝癌和肾癌类器官,可以采用瞬离的方法,瞬离的方法如下:设定转速3000转,配平,启动离心机,当转速达到3000转后立即按下停止键,待离心机停止转动后,拿出离心管。

                                       脑癌类器官消化后重新铺板

 

第二坑:轻轻一碰就掉落的类器官

肝癌和滋养层是最容易掉落的类器官,即使有Matrigel给其吸附,但是稍不注意换个液都能掉落,前功尽弃,而且这类的类器官有趋光性,一旦Matrige稍微铺的不均匀或者震板没有做好,就大的很大,小的很小,而越大的越容易掉落,看着都恼火

                                      组织消化酶(启达生物,货号:SD0013)

 

消化容易脱落的类器官采用的方法:

1. 预热组织消化酶,一定要预热;

2. 去除旧的培养基,向每个孔中加入500ul预热的组织消化酶,以从Matrigel中回收类器官

3. 轻轻吸取组织消化酶和Matrigel液滴混合物上下2-3次,将Matrigel和类器官从孔中移出。

4. 将混悬液转移到新无菌15 mL离心管中,每个15mL离心管最多可容纳8个孔的类器官(即:体积约为4-6mL)

5. 将混合物在37℃水浴中孵育5分钟,偶尔旋转试管以混合类器官消化酶;

6. 用1000ul移液管抽吸类器官混悬液20-30次,以机械方式破坏和分离类器官为单细胞

7. 用相同体积的完全类器官培养基中和组织消化溶液

8. 将试管在1500转下离心3分钟;

9. 铺在预先准备的培养板中继续培养或者冻存;

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